1.1 先确认溶剂优先看产品说明书/官网参数，常用基础溶剂：DMSO、乙醇、ddH₂O、PBS 等
1.2 必备试剂&耗材
1.2.1 无菌 EP 管
1.2.2 移液枪、枪头
1.2.3 对应溶剂：DMSO / 乙醇 / ddH₂O / PBS 等，具体根据说明书选择
1.2.4 助溶剂：Tween-80、PEG300 等
1.2.5 设备：天平、离心机、涡旋振荡器、超声仪、恒温金属浴
以 Rapamycin, CAS:53123-88-9 为例
2、母液溶解步骤
2.1 浓度计算公式：质量(mg) = 浓度(mM) × 体积(mL) × 分子量(g/mol)
举例：配制 1mL 10mM Rapamycin（MW=914.18），需称取9.1418 mg 粉末
2.2 实操流程
2.2.1 试剂开盖前先离心：3000–3500 rpm 离心 30 秒，把管壁、管盖附着粉末全部收集到管底；
2.2.2 称取粉末放入 EP 管；
2.2.3 加入溶剂（Rapamycin 溶剂为无水 DMSO），轻轻吹打溶解；
2.2.4 加溶剂后若液体直接澄清，即溶解完成；
2.2.5 若有浑浊、沉淀：涡旋 30–60s →40 kHz、100–150 W 超声 1–3min → 37℃温浴 5–10min，直至完全澄清；
⚠注意：超声易机械产热，易造成小分子降解，建议冰水浴控温超声；光敏化合物全程用棕色 EP 管或铝箔包裹 EP 管避光操作。
3、稀释至工作浓度
3.1 细胞实验
3.1.1 逐级梯度稀释：母液→中间浓度→工作浓度，例：10mM→1mM→100μM→工作浓度；
3.1.2 稀释溶液：细胞培养基、PBS 或对应实验缓冲液；
3.1.3 DMSO 终浓度控制：最终 DMSO 浓度≤ 0.1%，部分耐受细胞可至 0.5%，实验必须设置 DMSO 空白对照组，排除溶剂本身对细胞的干扰；
3.1.4 不同溶剂，不同细胞的耐受度不同，实验前需确定溶剂在实验细胞中的耐受范围。
3.2 动物给药
请先配制澄清的 25.0 mg/mL Rapamycin DMSO 母液，再依次添加助溶剂，体内实验的工作液，建议现用现配。配方中溶剂百分比均为终溶液中的体积占比。
3.2.1 静脉/腹腔注射
配比:10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% 生理盐水
以 1 mL 工作液为例：
▪取 100 μL 25.0 mg/mL 母液
▪加 400 μL PEG300 混匀
▪加 450 μL 生理盐水定容 即可得到终浓度为 2.5 mg/mL（2.73 mM）的澄清溶液。
3.2.2 口服/腹腔注射
配比：10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD 生理盐水)
以 1 mL 工作液为例：
▪取 100 μL 25.0 mg/mL 母液
▪加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液中 即可得到终浓度为 2.5 mg/mL（2.73 mM）的均匀悬浊液。
20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液（w/v 质量体积比）：2 g SBE-β-CD 粉末定容于 10 mL的生理盐水中，完全溶解至澄清透明，即可得到 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液。
3.2.3 长时间给药或给药体积较大的动物实验
配比：10% DMSO + 90% 玉米油
以 1 mL 工作液为例：
▪取 100 μL 25.0 mg/mL 母液
▪加到 900 μL 玉米油中，混合均匀即可得到终浓度为 2.5 mg/mL（2.73 mM）的澄清溶液。 ⚠注意：配好若轻微析出，可 37℃短暂温浴或超声复溶。
4、母液正确保存
4.1 储存：-20℃ / -80℃ 避光密封
4.2 建议按单次用量小份分装，避免反复冻融产品失效
4.3 常规小分子抑制剂稳定期：1–6 个月；光敏、易降解产品建议现配现用
5、常见不溶问题快速排查
6.1 大规格包装：棕色避光试剂瓶，如图 1
6.2 常规小规格包装：螺口密封 EP 管，如图 2
6.3 1mg/5mg 微量试剂包装：尖底螺口管，如图 3，产品在标签遮住的底部位置，这种包装能减少管壁残留，不浪费样品；开盖溶解前，先进行低速离心，将产品收集到底部后再进行后续操作。
